目的：采用免疫磁珠捕获（IMC）联合双内标PCR-ELISA（IMC-PCR-ELISA）技术，建立定量检测结核分枝杆菌的方法。方法制备能够特异性捕获结核分枝杆菌的免疫磁珠（Dynabeads?）。并根据结核分枝杆菌M tp40基因序列以及结核分枝杆菌复合体群IS6110序列，设计2对特异性引物（上游引物的5′端用生物素修饰），以及2条与PCR扩增片段等长的内参照片段（其与扩增模板在引物区的序列相同）和3套捕获探针（3′端用地高辛标记）。先通过免疫磁珠特异性捕获结核分枝杆菌，再联合双内标PCR-ELISA技术检测结核杆菌。结果采用IMC-PCR-ELISA技术定量检测结核分枝杆菌，全过程约4 h ，检测限为5×103 copies/mL ，当低内标模板浓度在30～70 copies/mL ，高内标模板浓度在8000～12000 copies/mL时，计算出的浓度与实际加入的目的模板浓度之间有良好的线性关系（r2＝0．998），未发现非特异性反应。结论成功建立了IMC-PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法，此方法具有快速、灵敏、特异、可定量的特点。
作者：王震；龚玉华；钱彩娣；孙春红；周丽萍；傅行礼；邵启祥
来源：国际检验医学杂志 2014 年 21期
