目的：构建日本血吸虫（Sj）重组质粒 pGEX-Sj32并研究其在大肠埃希菌 BL21中的表达效率。方法从该实验室保存的 BL21（pET28α-Sj32）重组菌中抽提质粒 pET28α-Sj32，PCR 扩增 Sj32抗原编码基因，定向克隆入穿梭载体 pGEX-1λT，构建重组质粒 pGEX-Sj32。将重组质粒转化大肠埃希菌 BL21（DE3），经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达；表达产物用SDS-PAGE 和 Western blot 进行鉴定。结果 PCR 成功扩增出 Sj32编码基因，并成功构建了重组质粒 pGEX-Sj32；SDS-PAGE显示相对分子质量约为58×103的重组蛋白，薄层扫描分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的21％；Western blot 显示重组蛋白可被日本血吸虫感染兔血清识别。结论成功构建日本血吸虫重组质粒 pGEX-Sj32，该重组质粒在大肠埃希菌 BL21中得到了高效表达，且表达蛋白具有特异的抗原性。
作者：谭建蓉；李文桂；张丽
来源：国际检验医学杂志 2014 年 23期
