目的：克隆Tp47基因、构建原核表达载体、表达并纯化Tp47蛋白，通过免疫印迹法（Western‐Blot）检测其免疫反应活性。方法聚合酶链反应扩增Tp47基因，将Tp47克隆至pGEX‐6P‐1载体，构建重组表达质粒pGEX‐6P1‐Tp47，经测序鉴定正确后，转化大肠埃希菌BL21（DE3），经诱导表达后，用亲和层析方法纯化重组蛋白，鉴定正确后采用Western‐Blot检测重组蛋白与梅毒阴性、阳性血清的免疫反应性。结果成功构建pGEX‐6P1‐T p47原核表达质粒，表达、纯化后获得了相对分子质量约为71×103的重组蛋白；Western‐Blot检测显示其能与梅毒阳性患者血清发生特异性反应，而与梅毒阴性患者血清无交叉反应性。结论成功克隆、表达、纯化T p47重组蛋白，其与临床各期梅毒患者血清具有较好的免疫反应性，为 T p47重组蛋白用于梅毒早期诊断提供了理论依据。
作者：郑和平；覃晓琳；黄进梅；薛耀华；白顺；吕萍；杨斌
来源：国际检验医学杂志 2015 年 10期
