目的：制备和鉴定抗人CD47分子胞外区蛋白单克隆抗体。方法聚合酶链反应扩增人CD47胞外区基因序列，重组至原核表达载体pET‐32a（＋）中，利用大肠埃希菌表达系统表达CD47胞外区蛋白。用纯化的CD47胞外区蛋白免疫小鼠，采用常规方法进行细胞融合，经克隆化培养后，筛选能够特异性分泌鼠抗人CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用酶联免疫吸附法、Western blot和流式技术检测抗体效价及特异性。结果成功构建人CD47原核表达载体，在BL21（DE3）中获得表达，经十二烷基磺酸钠‐聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western blot鉴定后，采用层析柱法获得纯化的CD47胞外区蛋白。以纯化蛋白为免疫原，成功制备具有较强亲和力的单克隆抗体。结论成功制备了针对CD47分子胞外区蛋白的高亲和力单克隆抗体，为进一步研究CD47的生物学功能奠定了基础。
作者：梁栋伟；刘集鸿
来源：国际检验医学杂志 2015 年 21期
