目的 以荧光聚合酶链反应(PCR)技术为基础,构建早期筛查结直肠癌的血液Septin9甲基化检测体系.方法 在美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库查找Septin9甲基化的CpG岛位点,设计相应的PCR引物.提取结直肠癌组织和癌旁组织的DNA,PCR扩增并测序确认Septin9基因启动子区高甲基化位点.针对高甲基化位点,设计荧光PCR和Taqman探针检测技术构建血浆标本甲基化检测体系,并对该检测体系的准确度、特异度、重复性及最低检出量进行评估分析.在57例结直肠癌患者和30例健康人血浆标本中进行Septin9甲基化检测,验证该检测体系的可靠性.结果 组织标本中经测序确认Septin9基因高甲基化位点.以该位点为靶点设计荧光PC R检测体系,经评估,该检测体系的准确度为100％,特异度和重复性均为100％,最低检出量可达0.1 ng/μL.在57例结直肠癌患者血浆标本中,Septin9甲基化位点检测的阳性率为71.92％(41/57),结直肠癌患者病理分期 Ⅰ和Ⅱ 期阳性率达64.2％;而健康人群血浆中Septin9基因均无甲基化.结论 以Septin9基因甲基化位点为靶标的血浆荧光PCR检测体系具有灵敏度、特异度及准确度高的特点,是结直肠癌早期筛查的可靠检测技术,具有良好的临床应用前景.
作者：束新华；潘志文；包叶江；金元；叶柳青；李德川；谢玲女；徐笑红
来源：国际检验医学杂志 2018 年 39卷 1期
