目的 构建pIRES2-EGFP-Lgr5重组表达载体,获得SW480/Lgr5瞬时基因转染细胞株,并探讨转染Lgr5基因对结肠癌细胞株生物学特性的影响.方法 运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从结肠癌组织中获得Lgr5全长基因,经双酶切(XhoI和BamHI)连接入真核表达载体pIRES2-EGFP中,利用脂质体法转染SW480细胞,经流式细胞术、Western blot、免疫细胞化学法检测Lgr5分子的表达；CCK-8法和悬滴实验分析Lgr5对结肠癌细胞增殖率和成球能力的影响,划痕实验分析Lgr5对结肠癌细胞迁移能力的影响.结果 成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP/hLgr5,并获得SW480/Lgr5瞬时基因转染细胞株；转染Lgr5基因的结肠癌细胞体外增殖速度加快,形成的细胞球大而紧密但迁移能力下降.结论 Lgr5基因转染促进结肠癌细胞株体外的生长,为进一步研究人Lgr5分子的生物学特性及其在结肠癌中的作用机制奠定了基础.
作者：高菲；傅丰庆；徐俊驰；高兵；胡玉敏；张学光
来源：国际免疫学杂志 2013 年 36卷 3期
