目的 优化人Hexastatin基因,并进行表达、纯化及体外的活性实验,为人Hexastatin进一步深入研究提供理论依据.方法 优化并合成人Hexastatin基因,然后与pET28a表达载体连接,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化诱导表达的条件.在超声破碎细菌和包涵体后,用Ni-NTA层析柱纯化蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)和Western Blot分析,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析肿瘤的抑制作用.结果 得到pET28a-Hexastatin表达质粒,在BL21菌体中高效表达,表达的可溶性Hexastatin蛋白占总蛋白量的45.1%,纯化后的人Hexastatin蛋白的纯度可达90%,质量浓度为80 μg/ml;Western Blot分析证实表达蛋白为目的蛋白;人Hexastatin蛋白对肿瘤细胞C6、人乳腺腺瘤细胞(MCF-7)以及人血管内皮细胞(HMEC)的生长有明显的抑制作用,抑制率分别为72.9%±3.6%、48.8%±2.9%、52.7%±2.5%.结论 成功地表达了优化的人Hexastatin蛋白,证实人Hexastatin蛋白对肿瘤细胞的抑制作用,为肿瘤的抗血管疗法提供了新途径.
作者:唐晓;宋娜玲;贺欣;王月英;刘谦;温镭;王德芝;韩英;张恒
来源:国际生物医学工程杂志 2012 年 35卷 2期