目的：构建含神经生长因子（NGF）基因的重组慢病毒载体，并在293T细胞中验证NGF是否可以过表达。方法：将NGF基因克隆至慢病毒穿梭质粒Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP，然后利用酶切鉴定、PCR鉴定及测序验证后，同两个辅助质粒共转染到293T细胞中，构建重组慢病毒载体。重组慢病毒感染293T细胞，通过荧光检测慢病毒的转染效果，用Western Blot检测NGF基因的表达。结果：酶切鉴定、PCR扩增鉴定和对重组慢病毒进行测序，提示重组慢病毒构建正确。荧光显微镜观察重组慢病毒感染的293T细胞，可见强荧光。Western Blot结果提示目的基因可正常表达。RT-PCR测得病毒滴度达到可利用标准。结论：人NGF重组慢病毒载体构建成功。
作者：张飞；吴建红；杜义恒；刘海涛；夏术阶
来源：神经损伤与功能重建 2014 年 5期
