为研究伤寒沙门菌质粒pRST98对人巨噬细胞THP-1自噬过程的影响,以携带伤寒沙门菌质粒pRST98的野生株ST6、消除pRST98的突变株ST6-ΔpRST98和将pRST98经接合转移的同补株ST6-c-pRST98为受试菌,与THP-1共培养建立感染模型,并加入自噬作用阻断剂氯喹(CQ)进行干预.首先测定CQ单独作用对细胞及细菌的影响,确定CQ最适浓度；在细菌和细胞共作用后的不同时间点收集细胞,通过蛋白免疫印迹法(WB)和mRFP-GFP-LC3质粒转染法检测细胞LC3Ⅱ蛋白、P62蛋白、自噬体及自噬溶酶体的变化.结果显示,30μmol/L CQ对细胞自噬的阻断效果明显,且细胞存活率超过50％,对细菌也无明显影响.WB结果显示,用该浓度CQ干预后,ST6-ΔpRST98感染组细胞的LC3Ⅱ及p62表达量上升程度显著高于野生株ST6组及回补株ST6-c-pRST98组；CQ干预组3株受试菌感染细胞LC3点状结构数量均高于未加CQ组,且ST6-△pRST98感染组细胞的点状结构数量明显增加.以上结果提示,伤寒沙门菌质粒pRST98在自噬前期发挥作用,早于溶酶体降解的过程.
作者：王贝贝；阙凤霞；李嫄渊；吴淑燕；黄瑞
来源：微生物与感染 2013 年 8卷 1期
