目的 在原核细胞中表达P16蛋白并纯化,研究外源性P16蛋白对肿瘤细胞周期的影响.方法 构建外源性P16融合蛋白的原核表达载体pQE31-p16.IPTG诱导大肠杆菌BL21菌株表达P16融合蛋白,通过亲和层析柱纯化目的 蛋白,经Western-blot鉴定后,将P16蛋白转导入人肺腺癌细胞系A549中,利用免疫细胞化学方法对蛋白进行细胞内定位,同时绘制细胞生长曲线,并用流式细胞仪分析细胞周期的变化.结果 所构建P16融合蛋自的原核表达载体pQE31-p16,可在大肠杆菌中稳定表达,通过纯化获得P16融合蛋白.利用lipofectamine TM2000转染试剂可将P16蛋白转入A549细胞中,生长曲线与流式细胞术结果显示P16蛋白可抑制肿瘤细胞增殖.结论 原核细胞表达的P16蛋白经纯化,转导进入A549细胞,可影响其生长周期,抑制A549细胞的增殖.
作者：江晖；白静；史忠诚；傅松滨
来源：国际遗传学杂志 2007 年 30卷 2期
