目的 建立稳定表达CLN3(ceroid-lipofuscinosis,neuronal 3)和CLN3 1.02 kb缺失突变体基因(CLN3Δex7/8)的稳定细胞系,研究全长CLN3在人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞中的促增殖作用及7、8号外显子缺失突变体对细胞增殖的影响.方法 利用药物Zeocin筛选构建稳定过表达CLN3全长基因和CLN 3Δex7/8的SH-SY5Y细胞系,用RT-PCR,Real Time PCR和Western印迹检测CLN3全长及截短基因(CLN 3Δex7/8)的表达,并用Cell Counting Kit-8(CCK8)检测细胞增殖,比较两种细胞系对SH-SY5Y的增殖的影响.结果 成功构建了稳定过表达CLN3全长基因细胞系SH-SY5Y/C和CLN3Δex7/8的细胞系SH-SY5Y/Ct,mRNA水平分别过表达43倍和124倍,蛋白水平分别过表达1.5倍和20倍.过表达CLN3全长基因与空质粒对照组相比,增殖速率明显提高(P=0.044 527),差异有统计学意义,而过表达CLN 3Δex7/8的空质粒对照组相比,增殖速率无差别(P =0.345 329),差异无统计学意义.CLN3Δex7/8对细胞的增殖没有明显促增殖作用.结论 CLN3全长基因对细胞增殖具有明显促进作用,而过表达CLN 3Δex7/8对细胞的增殖没有明显影响,结果提示CLN3基因的7、8号外显子是调控细胞增殖的关键区域.
作者：刘静；杨萱；迟洪滨；吴丹；吴白燕
来源：国际遗传学杂志 2012 年 35卷 3期
