目的建立一种最优化的提取高质量人类精液基因组DNA的方法,为辅助生殖技术男性不育分子生物学科学研究提供技术支持.方法提取人类精液基因组DNA,优化设计实验步骤,研究初始样品类型、初始样品量、二硫苏糖醇(DTT)剂量、蛋白酶K(PK)消化时间、混匀震荡等因素对DNA的提取效果的影响,应用核酸定量和琼脂糖凝胶电泳分析比较各组提取效果的差异.结果应用自然分层后的精液沉淀提取DNA较原始精清可获得较高浓度的DNA.初始样品量为100~150μl时可获得较好的提取效果,随着样本量的增加,DNA提取效果逐渐下降.在样本中加入DTT可以明显提高DNA产量,DTT的加入利于DNA裂解及提取,且增加了DNA的稳定性. PK适宜消化时间为5~8 h;时间过短(<2 h),DNA裂解不全提取效果较差,时间过长(>12 h)则会造成DNA降解.在PK消化时,摇床震荡可以提高DNA产量.结论应用自然分层后的精液沉淀提取DNA,当初始样品量为100~150μl时,在样本中加入1M DTT 20μl,PK消化时间为5~8 h,并在消化时摇床震荡,可以获得高质量的基因组DNA.
作者：覃莉；江莉；李慕军；吴华
来源：广西医学 2013 年 4期
