本研究的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA)是筛选得到的高产精氨酸突变菌株,其中argB基因编码的乙酰谷氨酸激酶(NAGK)是精氨酸合成过程中的关键酶.为了进一步研究该酶的相关特性,以钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA)基因组为模板,扩增得到其argB基因,成功构建了pET-28a-argB重组质粒,并在E.coli BL21(DE3)中诱导后高效表达.利用载体pET-28a上的His6·Tag标记选用Ni柱亲和层析法纯化表达具有活性的NAGK,纯化后酶的比活力达到7.28 U/mg,纯化倍数达66.18.并对该酶的酶学性质进行了初步研究,该酶的最适反应温度为30 ℃;最适pH值为9.0;酶学动力学参数以N-乙酰谷氨酸为底物的Km为3.35 mmol/L;金属离子Cu2+、Mn2+、螯合剂对乙酰谷氨酸激酶均有明显的抑制作用.
作者：刘飞；饶志明；徐美娟；许泓瑜；张晓梅；窦文芳；许正宏
来源：工业微生物 2010 年 40卷 4期
