目的:研究钙网蛋白(CRT)发挥免疫生物学活性的主要功能区域.方法:采用PCR法从CRT基因cDNA全长中扩增第150-230位编码氨基酸所对应的核苷酸序列片段,利用分子生物学方法构建原核重组表达质粒,采用大肠杆菌表达系统进行原核表达;通过亲和纯化得到目的蛋白,分析目的蛋白特性;并通过体内、体外实验对蛋白的免疫学活性进行分析.结果:成功构建了表达CRT150-230片段(rCRT/150-230)的原核表达质粒,并从细菌裂解液上清中纯化得到目的蛋白,蛋白单体通过分子间二硫键形成二聚体,天然状态下形成多聚体;体外研究表明rCRT/150-230促进小鼠脾细胞的分裂,活化巨噬细胞产生一氧化氮(N0),诱导人外周血单个核细胞产生TNF-α;体内研究表明,rCRT/150-230刺激小鼠产生高滴度抗体,该特异性抗体能识别rCRT/150-230与rCRT.结论:rCRT/150-230蛋白具有与rCRT相似的免疫活性,因此推测该蛋白片段是全长CRT发挥免疫学活性的区域.
作者：张丽娟；高晓明
来源：贵阳医学院学报 2015 年 40卷 9期
