目的:探讨cdh5-mRNA在野生型斑马鱼胚胎期发育过程中的表达模式.方法:收取tuebingen野生型斑马鱼多个发育时间节点的胚胎,提取其总RNA,体外逆转录后RT-PCR扩增cdh5基因片段,将cdh5基因片段插入pCS2+质粒载体中,挑选阳性单克隆菌落,通过双酶切、测序等方法鉴定pCS2+-cdh5重组质粒;重组质粒单酶切后用T3RNA体外转录体系制备地高辛标记的cdh5基因的反义mRNA探针,对斑马鱼全胚胎进行原位杂交,显微镜下观察各发育节点胚胎cdh5-mRNA杂交信号并拍照.结果:构建并鉴定了pCS2+-cdh5重组质粒,各发育节点胚胎经全胚胎原位杂交后发现在tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育至3.7～12 hpf时cdh5-mRNA呈低丰度泛在表达,18 ～ 36 hpf时在后脑及血管处表达、在造血系统高表达,48 hpf后仅在脑部和血管处低表达.结论:在野生型斑马鱼胚胎期发育过程中可以检测到cdh5-mRNA在后脑和血管处有表达,并且在造血组织高表达.
作者：吴西军；姚冬静；刘庆；杨小燕；王念雪；王一慧；舒莉萍；何志旭
来源：贵州医科大学学报 2019 年 44卷 11期
