目的 探索在β-淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体处理的BV2小胶质细胞模型中α7烟碱型乙酰胆碱受体的激动剂PNU282987(PNU)对Seipin蛋白表达及其介导自噬的影响.方法 采用CCK8法检测不同浓度Aβ处理的BV2细胞的存活率筛选Aβ浓度;设置正常组(未做任何处理)和Aβ组(Aβ孵育24 h),采用Western blot法检测细胞经Aβ处理后Seipin蛋白的表达水平;设置Aβ组(Aβ孵育24 h)、Aβ+PNU组(先加入PNU处理18 h、再加入Aβ孵育24 h),采用Western blot法检测Aβ的表达水平;设置正常组(未做任何处理)、PNU组(PNU处理18 h),采用Western blot检测Seipin、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1的表达;将合成的RNAi慢病毒感染BV2细胞,设置阴性对照组(Negative control,NC)、靶向Seipin小干扰RNA(Small interfering RNA;si-Seipin)组,观察Seipin被干扰情况;设置NC+Aβ组(加入NC和Aβ共同孵育)、NC+Aβ+PNU组(加入NC、Aβ和PNU共同孵育)及si-Seipin+Aβ+PNU组(加入si-Seipin、Aβ和PNU共同孵育),采用Western blot检测Aβ和LC3的表达.结果 CCK8结果显示随着Aβ浓度的增加,BV2细胞存活率逐渐降低,浓度为10μmol/L时、细胞存活率为70％,故选择该Aβ浓度为造模浓度;Western blot结果显示,与正常组相比,Aβ处理的BV2细胞Seipin蛋白表达

作者：张捷；何军；熊浪；陈道慧；彭宁；黎婷婷；任真奎；禹文峰；吴昌学

来源：贵州医科大学学报 2021 年 46卷 10期