目的：探讨丹参酚酸B盐（Sal B）对大鼠肝星状细胞（HSC）中内皮素-1（ET-1）激活的RhoA/ROCK 信号通路的影响。方法采用肝脏原位灌流酶消化、Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠 HSC。免疫蛋白印迹法检测肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（MYPT1）磷酸化。特异性抗体沉淀ROCK，进行体外磷酸化反应，以磷酸化底物Thr696-MYPT1（654-880）的含量反映ROCK活性。GST下拉实验检测RhoA活性。结果在大鼠HSC中，ET-1刺激后，RhoA和ROCK II活性显著增加，ROCK I活性无明显变化，MYPT1 Thr696和Thr850磷酸化水平均显著增加。ET-1刺激1 min和10 min时，RhoA活性分别是基础状态下的1．95倍（P＜0．05）和5．84倍（P＜0．01）。ET-1刺激2．5 min和15 min时，ROCK II 活性分别是基础状态下的3．49倍和4．83倍，均P＜0．01，差异有统计学意义。ET-1刺激2．5 min时，MYPT1 Thr696磷酸化水平是基础状态下的3．86倍；刺激15 min 时，Thr696磷酸化达到高峰，是基础状态下的5．17倍。Thr850磷酸化亦在 ET-1刺激15 min达到高峰，是基础状态下的3．33倍，均P＜0．01，差异有统计学意义。在ET-1刺激前给予10-5mol/L Sal B预处理，则使ET-1诱导的RhoA和ROCK II活性分别下降66．84％和76．79％，ET-1诱导的MYPT1 Thr696磷酸化下降80．09％，对T

作者：徐虹；平键；卢超；周扬；徐列明

来源：肝脏 2014 年 4期