目的:构建结核分枝杆菌MycP1蛋白原核表达系统.方法:构建pGEX-4T-1-Rv3883c重组质粒,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot法检测目标蛋白的表达情况.目标蛋白经亲和层析纯化后,以不同质量浓度MycP1作用于小鼠巨噬细胞ANA-1,48 h后XTT法检测活细胞数,同时测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力,以评价其细胞毒性.结果:成功构建pGEX-4T-1-Rv3883c质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达,经鉴定,表达的融合蛋白为目标蛋白MycP1.该融合蛋白作用后可使ANA-1活细胞数下降(F=34.327,P<0.001),培养上清液中LDH活力升高(F=336.720,P<0.001).结论:成功构建了MycP1原核表达系统,目标蛋白对巨噬细胞有一定的毒性效应.
作者：黄丹丹；鲍朗；杨晓玲；邓仪昊；廖丹
来源：郑州大学学报（医学版） 2012 年 47卷 4期
