目的:克隆一株能高效转化合成屈螺酮的重要中间体(7α,15α-二羟基DHEA)的尖孢镰刀菌参与反应的关键酶细胞色素P450氧化酶(CYP)基因CYP6003A1.方法:根据尖孢镰刀菌转录组得到CYP基因,自主设计引物,运用Trizol法提取DHEA诱导48 h的尖孢镰刀菌的总RNA,通过PCR扩增尖孢镰刀菌CYP基因并进行基因测序;运用生物信息学分析得到的cDNA序列.结果:成功扩增出全长3 459 bp的cDNA片段,将CYP6003A1基因的氨基酸序列通过NCBI上的BLAST进行在线比对,对照结果显示与CYP6003A1相似度前10个基因有3个是CYP基因,其余均是与CYP基因相关的基因.CYP6003A1基因生物信息学分析结果显示,该基因片段编码691个氨基酸的多肽.结论:从尖孢镰刀菌中成功克隆了CYP6003A1基因并进行了生物信息学分析.
作者：单丽红；姜冬冬；赵沙沙；黄佳佳；朱丽；刘宏民
来源：郑州大学学报（医学版） 2018 年 53卷 1期
