目的 构建人原代成骨细胞氟中毒模型,检测不同剂量氟化钠对人成骨细胞中CyclinD1基因启动子区甲基化、mRNA转录及蛋白表达的影响,从细胞周期调控基因的表观遗传学角度探索氟中毒发生机制.方法 在知情同意原则下,收集贵州航空工业集团贵阳医院骨科外伤手术健康人(车祸)髂骨或股骨松质骨.采用酶消化法分离人原代成骨细胞,以碱性磷酸酶及钙化结节染色进行细胞鉴定;以0、125、250、500及1 000 μmol/L氟化钠处理细胞72 h.以硫化测序PCR法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测CyclinD1基因启动子区甲基化状态;以实时荧光定量PCR(QT-PCR)检测CyclinD1基因转录mRNA相对表达量;以免疫印迹法(Western-blotting)检测CyclinD1蛋白表达.结果 分别以0、125、250、500及1 000 μmol/L氟化钠处理细胞72 h后,CyclinD1基因启动子区未检测到甲基化;CyclinD1基因mRNA转录相对表达量在0、125、250、500及1 000 μmol/L NaF剂量组分别为0.414±0.093、0.742 ±0.089、0.796 ±0.122、1.114 ±0.260、1.140±0.171,NaF剂量组均高于对照组(F=18.89,P＜0.05).CyclinD1蛋白相对表达量分别为0.304±0.014、0.395±0.020、0.511 ±0.042、0.565±0.028、0.719±0.047,NaF剂量组均高于对照组(F=71.80,P＜0.05).CyclinD1基因转录mRNA及

作者：严威敏；廖玉丹；罗鹏；潘雪莉

来源：环境与健康杂志 2016 年 33卷 4期