目的 构建抗人Endoglin胞外段的特异性单链抗体(single chain variable fragment,scFv)噬菌体表面呈现文库.方法 用重组人Endoglin(recombinant human Endoglin, rhEndoglin)胞外段蛋白免疫Balb/c小鼠,提取脾脏组织mRNA,经RT-PCR分别扩增出VH(heavy chain variable region)、VL(light chain variable region)基因,经Linker连接成scFv基因,再把scFv基因重组到噬菌粒载体pCANTAB5E,转化到大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7拯救后建成噬菌体呈现文库.用rhEndoglin对文库进行5轮吸附-洗脱-富集panning淘筛,选择ELISA结果最强的克隆提取质粒并测序.结果 经过筛选,随机挑取94个克隆进行ELISA检测,37个克隆呈阳性.序列分析表明,该scFv DNA全长738bp.其中VH基因366bp,编码122个氨基酸残基,VL基因327bp,编码109个氨基酸残基,它们之间通过(Gly4Ser)3组成的15肽连接.结论 成功构建了抗人Endoglin胞外段scFv噬菌体表面呈现文库,并筛选获得一个能与Endoglin特异结合的重组噬菌体克隆.
作者：赵泽文；梁志清；史常旭；常青；李军；李斌
来源：华南国防医学杂志 2008 年 22卷 4期
