目的:通过检测感染携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒的脐带间充质干细胞(hUC‐MSC)内酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运体(DAT)和多巴胺(DA)的表达水平及动态变化,探讨hUC‐MSC在 HGF过表达的情况下是否能向多巴胺能神经元分化,为 HGF基因修饰hUC‐MSC治疗帕金森病提供细胞基础。方法采用组织块法分离培养hUC‐MSC ,流式细胞仪检测细胞是否表达间充质干细胞分子表面标志CD29、CD44和CD105;不同感染复数(0、50、100、150、200、400)的携带绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad‐GFP)感染hUC‐MSC后,流式细胞仪检测感染效率,并确定最佳感染复数;运用携带HGF的腺病毒感染hUC‐MSC后,细胞免疫酶化学方法检测TH和DAT的表达情况。结果采用组织块法可从脐带中成功分离出(表达间充质干细胞分子表面标志CD29、CD44和CD105)hUC‐MSC ;Ad‐GFP可高效感染hUC‐MSC ,随着感染复数的升高,感染效率可达99.99%;感染携带HGF的腺病毒(Ad‐HGF)后,hUC‐MSC可逐渐表达TH和DAT ,同时细胞形态也逐渐由纺锤状向多角形和不规则样转变。结论腺病毒可高效感染hUC‐MSC ;感染Ad‐HGF后,hUC‐MSC可逐渐向多巴胺能样神经元分化。
作者:张玉镇;娄季宇;杨霄鹏;曾志磊;王珊珊;刘新珊;张晓明;尹红蕾;王运良
来源:中国实用神经疾病杂志 2015 年 13期