目的 探讨FAM134B介导的内质网自噬在无镁外液致痫海马神经元线粒体钙稳态及凋亡中的作用.方法 原代培养新生24 h SD大鼠海马神经元,建立无镁外液诱导的体外癫痫模型,并通过慢病毒载体干预FAM134B表达.将培养10 d的海马神经元随机分为对照组(CON)、无镁诱导组(AE)、空载病毒组(NC)、FAM134B过表达组(Lenti-FAM134B)和FAM134B低表达组(Lenti-FAM134B-shRNA).采用TUNEL法检测细胞凋亡,钙离子荧光探针Mag-Fluo-AM和Rhod-2分别检测内质网和线粒体钙离子浓度,电镜下观察线粒体超微结构,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、线粒体-内质网结构偶联中IP3R、细胞色素C(CytC)和活化cleaved caspase-3的表达.结果(1)与CON组相比,AE组神经元亡明显增加,FAM134B过表达使无镁外液致痫海马神经元凋亡明显减少,而降低FAM134B表达发挥相反作用;(2)与CON组相比,AE组LC3-Ⅱ/Ⅰ增加,FAM134B过表达显著增加无镁外液致痫海马神经元中LC3-Ⅱ/Ⅰ,而降低FAM134B表达发挥相反作用;(3)与CON组相比,AE组IP3R表达升高,内质网Ca2+浓度降低,线粒体Ca2+浓度升高;FAM134B过表达使无镁外液致痫海马神经元中IP3R表达减低,内质网Ca2+浓度升高,线粒体Ca2+浓度降低,而降低FAM134B表达发挥相反作用;(4)与CON组相比,AE组海马神经元线粒
作者:李钰娟;王翠;杜丽媛;孟祥荷;刘凤霞;谢南昌
来源:中国实用神经疾病杂志 2021 年 24卷 6期