目的:建立在人皮肤成纤维细胞中稳定表达的细胞株,为组织型纤溶酶原激活因子(TPA)功能分析和对缺血性心脏疾病基因治疗提供理论依据.方法:构建真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA,然后将其转入人皮肤成纤维细胞,经G418筛选后,用RT-PCR,ELISA和发色底物法观察外源性TPA表达情况.结果:真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA在人皮肤成纤维细胞中获有效表达,酶联免疫吸附法TPA蛋白表达定量检测结果为每24小时643.5 ng/106个细胞,高于未转pcDNA3.1(+)TPA的皮肤成纤维细胞每24小时19.2 ng/106个细胞;发色底物法测得外源性TPA活性为每24小时122.6 U/106个细胞,亦高于未转pcDNA3.1(+)TPA的皮肤成纤维细胞每24小时5.8 U/106个细胞.结论:pcDNA3.1(+)TPA转入人皮肤成纤维细胞后,外源性TPA基因获有效表达,该细胞模型将成为TPA功能研究和缺血性心脏病基因治疗的重要方法.
作者：邓洪波；杨宇；杨进福；唐滔；周文武；刘剑
来源：中南大学学报（医学版） 2005 年 30卷 4期
