目的:应用RNA干扰沉默SMN1基因的表达建立脊髓性肌萎缩症(SMA)的细胞模型.方法:将pshRNA-SMN1重组质粒转染人骨髓问充质干细胞(hMSCs),经G418筛选得到能稳定表达目的shRNA的单克隆细胞系后将其诱导分化为神经元样细胞(NLCs)建立SMA细胞模型组.同期设立转染重组质粒pshRNA-0的对照组和未转染重组质粒的空白对照组.观察NLCs的细胞形态,采用免疫细胞化学染色分析NLCs的NSE和NF蛋白表达,用RT-PCR和免疫印迹方法检测NLCs的SMN mRNA及其蛋白表达.结果:诱导后各组细胞呈典型的神经元样细胞形态且NSE和NF蛋白表达阳性;其fl-SMN mRNA,△7-SMN mRNA及fl-SMN蛋白表达均较诱导前增加(P<0.05),但SMA细胞模型组的fl-SMN mRNA及蛋白表达仍明显低于对照组(P<0.01);而诱导后△7-SMN mRNA的表达在各组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:SMN1 mRNA及其蛋白被抑制的MSCS诱导分化为NLCs后可以作为SMA的细胞模型.
作者:杨晓苏;胡益民;肖波;杨期东;赵惠敏
来源:中南大学学报(医学版) 2008 年 33卷 12期