目的:探讨下调生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45β(growth arrest and DNA damage inducible protein 45β,GADD45β)表达对PC9肺腺癌细胞及吉非替尼敏感性的影响.方法:设计并合成GADD45β基因小干扰RNA(GADD45β-small interfering RNA,GADD45β-siRNA)序列,通过慢病毒介导将GADD45β-siRN转入PC9肺腺癌细胞中,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western印迹检测转染前后PC9肺腺癌细胞GADD45β的mRN及蛋白水平,采用膜联蛋白V(annexin V)-别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)双染流式细胞法检测转染后细胞凋亡水平;通过流式细胞术检测转染后细胞内DNA含量,计算转染后细胞各周期时相百分率,分析转染对细胞生长周期的影响;通过计数克隆形成数检测RNA干扰对细胞成瘤能力的影响;采用MTT法检测PC9肺腺癌细胞的吉非替尼半数抑制浓度IC50.结果:筛选出5'-AAATCCACTTCACG CTCAT-3‘为GADD45β基因RN干扰的有效序列.转染GADD45β-siRNA 48 h后,qRT-PCR和Western印迹结果显示PC9肺腺癌细胞GADD45β的mRNA和蛋白表达水平明显下调(均P＜0.05),细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),且成瘤克隆数明显减少(P＜0.05);PC9肺腺癌细胞位于S期及G2/M期细胞增多(P＜0.05),吉非替尼的IC50明显下降(p＜0.05).结论:PC9肺

作者：胡皓；阙凯琳；彭昊；刘佳；韩宸；张娜；侯涛；胡春宏；马进安

来源：中南大学学报（医学版） 2018 年 43卷 11期