目的运用植物转基因技术,探索构建表达人类β-防御素-2 (hBD-2) 的植物生物反应器的可能性及技术路线.方法将C端带myc和6xHis双标记的重组hBD-2 基因插入植物真核表达载体pCAMBIA1304中, 构建C端带myc和6xHis双标记的重组hBD-2植物真核表达载体rpCAMBIA1304/hBD-2/His.利用此载体转化根癌农杆菌LBA4404,经卡那霉素进行抗性基因筛选和PCR检测,确定根癌农杆菌的阳性克隆.重组hBD-2通过转化阳性的根癌农杆菌被导入小麦幼胚愈伤组织细胞,经潮霉素进行抗性基因筛选,获得抗性愈伤组织.结果酶切分析、PCR验证和DNA测序等证据表明: C端带myc和6xHis双标记的重组hBD-2已被正确地插入pCAMBIA1304载体中, 并位于CaMV 35S与Nos终止子之间,提示重组hBD-2/His基因的植物表达载体rpCAMBIA1304/hBD-2/His已被成功构建.卡那霉素抗性基因筛选和PCR检测显示:rpCAMBIA1304/hBD-2/His已成功转化根癌农杆菌LBA4404,阳性克隆菌株已获得. 潮霉素抗性筛选结果提示:hBD-2基因被导入小麦幼胚愈伤组织细胞.结论本研究为进一步培育hBD-2遗传表达植株奠定了基础.
作者：蔡绍晖；余懋群；杨晓鹃；杜军；黄宁；王伯瑶
来源：四川大学学报(医学版) 2003 年 34卷 3期
