目的 研究慢病毒载体pGCL-GFP介导的结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(CTGF-ShRNA)干扰质粒对低氧诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFs)CTGF表达、细胞增殖和胶原合成的影响.方法 构建并筛选CTGF-ShRNA干扰质粒,PCR鉴定阳性克隆,重组质粒转染后随机分为4组,正常(Control)组,低氧(Hypoxia)组,低氧+慢病毒空载体(Hypo+pGCL-GFP)组和低氧+CTGF-ShRNA(Hypo+CTGF-ShRNA)组,实时荧光定量PCR及Western blot分析4组CFs CTGF mRNA及蛋白的相对表达水平,WST-1试剂盒和羟脯氨酸检测试剂盒分别检测4组细胞增殖情况和培养基中的胶原含量.结果 成功构建并筛选CTGF-shRNA.与Control组比较,Hypoxia组、Hypo+pGCL-GFP组、Hypo+CTGF-ShRNA组CTGF mRNA相对表达水平升高(P＜0.05),CTGF蛋白相对表达水平升高(P＜0.05),细胞增殖活跃(P＜0.05),胶原合成升高(P＜0.05).与Hypoxia组和Hypo+pGCL-GFP组比较,Hypo+CTGF-ShRNA组低氧诱导的CFs CTGF mRNA表达被抑制(P＜0.01),CTGF蛋白合成降低(P＜0.01),细胞增殖被抑制(P＜0.01),胶原合成减少(P＜0.01).结论 CTGF-ShRNA抑制低氧诱导的CFs CTGF mRNA表达和蛋白合成,抑制低氧诱导的CFs细胞增殖和胶原合成.

作者：孙家扬；刘春涛；黄妮雯

来源：四川大学学报（医学版） 2011 年 42卷 2期