目的 探讨膜相关蛋白NUMB调控肿瘤增殖的机制.方法 构建NUMB基因敲除载体,转染Hela细胞后,经抗性筛选获得稳定细胞株,通过实时定量PCR (qRT-PCR)和Western blot检测NUMB基因和蛋白表达,验证NUMB基因敲除效果.采用裸鼠成瘤实验研究NUMB基因敲除对肿瘤增殖的影响;利用流式细胞术和Brdu标记实验检测NUMB缺失对细胞周期的影响;在体外模型中检测细胞周期各个时期多种调控蛋白的表达水平.结果 Western blot及qRT-PCR结果表明NUMB基因敲除的体外模型构建成功;裸鼠成瘤实验显示NUMB基因敲除促进肿瘤增殖;流式细胞术和Brdu标记实验表明NUMB基因缺失加速细胞周期G1/S期转换,促进肿瘤细胞增殖;Western blot检测发现NUMB基因敲除组细胞周期调控蛋白Cyclin-E的表达增加,而P27的表达降低.结论 NUMB通过调控Cyclin-E以及P27的蛋白水平影响细胞周期,进而调控肿瘤增殖.
作者：俞谦；邵喜明；李华顺
来源：四川大学学报（医学版） 2014 年 45卷 5期
