目的 建立人源性雌激素受体(hERα/β)介导的荧光素酶报告基因试验方法,比较不同雌激素受体亚型介导的报告基因试验的反应性和灵敏度,为检测内分泌干扰物拟雌激素活性提供研究工具.方法 以恒河猴肾细胞(LLC-MK2)为转染细胞,以萤火虫荧光素酶基因(Luc)为报告基因,利用瞬时转染的方法,将表达hERα/hERβ的质粒与重组Luc报告基因质粒pERE-minP-Luc2P、内对照质粒pGL4.74共转染LLC-MK2细胞,建立由hERα/β介导的Luc报告基因试验方法.以雌二醇(E2)、己烯雌酚(DES)作为阳性受试物,以10 s mol/L雌激素拮抗剂(ICI 182,780)和不同浓度的E2共同染毒,观察Luc表达的变化.用双酚A(BPA)和染料木黄酮(GS)对方法的有效性进行检验并比较雌激素受体两亚型反应性、灵敏度和特异性.结果 hERα报告基因系统对E2的最低检测限为1.9×10-11 mol/L,在10-8 mol/L处获得最高诱导倍数,是对照组的30.7倍.hERp报告基因系统对E2的最低检测限为2.2×10-11 mol/L,在10-8 mol/L处获得最高诱导倍数,是对照组的14.4倍.ICI 182,780在10-5 mol/L浓度下能显著抑制两个报告基因系统E2的雌激素活性.未转染受体表达载体hER-pcDNA3.1的LLC-MK2细胞用不同浓度E2诱导,两个报告基因系统均与E2无明显反应.BPA和GS在以上两个不同的报告基因系统中均能诱导L

作者：刘杨；黄小明；曲绍娟；黄洁；刘运夏；钟灵毓；陈奕；李云

来源：四川大学学报（医学版） 2015 年 46卷 6期