目的 明确缺氧与肺癌细胞释放microRNA-155的关系,揭示肺癌脑转移的可能机制.方法 建立人A549肺癌细胞缺氧模型,缺氧培养肺癌细胞0.5、2、4、8、12和24 h(并设同期常氧对照组)后,免疫荧光法和Western blot法测定肺癌细胞内热休克蛋白70 (hsp70)的表达水平;建立hsp70过表达的人肺癌细胞株A549/hsp70,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定缺氧各时点A549细胞和A549/hsp70细胞培养液内microRNA-155含量.构建体外血脑屏障模型,给予缺氧不同时间点的A549肺癌细胞培养液后,辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)检测体外血脑屏障模型的通透性变化;自动细胞计数仪计数Transwell下室培养液中的A549肺癌细胞数.将缺氧不同时间点的A549肺癌细胞培养液经尾静脉注入Wistar大鼠体内,Western blot法测定紧密连接蛋白occludin在脑组织血脑屏障内皮细胞中的表达水平;伊文思兰检测动物血脑屏障通透性改变.结果 肺癌细胞缺氧8h时,肺癌细胞内hsp70和培养液内microRNA-155的表达均达最高水平(P＜0.05).与A549细胞相比,缺氧2～24 h时,A549/hsp70细胞培养液内microRNA-155含量的增加更显著.缺氧8h,血脑屏障通透性最大,透过血脑屏障模型的肺癌细胞数最多.在动物水平,给予缺氧8h的肺癌细胞培养液后,动物脑组织血脑屏障内皮细胞的o
作者：刘洋；贾永森；秦丽娟
来源：四川大学学报（医学版） 2019 年 50卷 6期
