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目的 探讨内生多肽(Elafin)转染气道上皮细胞经不同细菌产物诱导后对铜绿假单胞菌(P.aeruginosa,Pa)生物膜(biofilm,BF)的效应差异.方法 将pEGFP-N1-elafin转染到培养的肺腺癌细胞株A549细胞后,用表皮葡萄球菌(表葡组)、大肠埃希杆菌(E.coli组)和铜绿假单胞菌(Pa组)培养上清分别孵育细胞24h,另设转染空载体A549细胞作为正常组.用ELISA和Western blot检测每组细胞Elafin分泌水平和细胞内含量;体外平板法制备Pa-BF模型,用快速银染法和扫描电镜鉴定;将BF载体放入上述4组细胞中继续孵育8h,银染法观察BF中每个视野细菌的(灰度)面积积分,扫描电镜观察形态学改变.结果 Pa组细胞Elafin分泌水平和细胞内含量均较正常组的明显升高(P<0.01),E. coli组也有升高(P<0.05),表葡组无明显变化;各组BF面积积分也显示有明显差异,Pa组、E. coli组BF结构较正常组明显松散,尤以Pa组为甚,表葡组则没有明显变化.结论 不同细菌对Elafin的诱导表达能力有差异:Pa较强,E. coli次之,表葡不明显;Elafin能清除生物膜细菌.

作者:聂晓红;周向东;黄长武

来源:基础医学与临床 2007 年 27卷 4期

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聂晓红;周向东;黄长武
来源:
基础医学与临床 2007 年 27卷 4期
标签:
内生多肽 生物膜 铜绿假单胞菌 大肠埃希杆菌 表皮葡萄球菌
目的 探讨内生多肽(Elafin)转染气道上皮细胞经不同细菌产物诱导后对铜绿假单胞菌(P.aeruginosa,Pa)生物膜(biofilm,BF)的效应差异.方法 将pEGFP-N1-elafin转染到培养的肺腺癌细胞株A549细胞后,用表皮葡萄球菌(表葡组)、大肠埃希杆菌(E.coli组)和铜绿假单胞菌(Pa组)培养上清分别孵育细胞24h,另设转染空载体A549细胞作为正常组.用ELISA和Western blot检测每组细胞Elafin分泌水平和细胞内含量;体外平板法制备Pa-BF模型,用快速银染法和扫描电镜鉴定;将BF载体放入上述4组细胞中继续孵育8h,银染法观察BF中每个视野细菌的(灰度)面积积分,扫描电镜观察形态学改变.结果 Pa组细胞Elafin分泌水平和细胞内含量均较正常组的明显升高(P<0.01),E. coli组也有升高(P<0.05),表葡组无明显变化;各组BF面积积分也显示有明显差异,Pa组、E. coli组BF结构较正常组明显松散,尤以Pa组为甚,表葡组则没有明显变化.结论 不同细菌对Elafin的诱导表达能力有差异:Pa较强,E. coli次之,表葡不明显;Elafin能清除生物膜细菌.