目的 构建人野生型DJ-1及其L166P突变体的慢病毒载体并探讨慢病毒载体在构建基因过表达细胞模型中的作用.方法 分别构建野生型DJ-1与L166P突变型DJ-1慢病毒载体质粒.进行测序确定比对正确后,进行质粒的大量扩增与制备并转染包装细胞系HEK293T细胞,荧光法和Western blot检测野生型DJ-1与L166P突变型DJ-1在细胞系中的表达.在确定目的蛋白正确表达之后,大量转染HEK293T细胞进行包装并生产携带目的基因的慢病毒颗粒.测定病毒上清滴度后感染PC12细胞,荧光显微镜和Western blot观察GFP荧光强度以及目的蛋白的表达,确定病毒的感染效率.结果 成功构建携带DJ-1野生型及其突变体的慢病毒载体.该病毒载体可以转染进入HEK293T细胞内且目的蛋白能够正确表达.LV-DJ-1与LV-DJ-1/L166P的病毒滴度分别为2×109 TU/mL与2×108 TU/mL.病毒上清可以高效感染PC12细胞,绝大多数细胞可表达目的蛋白.外源野生型DJ-1和L166P突变体的蛋白表达量分别是内源性含量的315
作者：任静；李毅；杨慧；鲁玲玲
来源：基础医学与临床 2018 年 38卷 1期
