目的 检测非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型小鼠的肝脏病理变化,并探索一种获得大量高活性、高纯度的NAFLD小鼠原代肝细胞的实验方法.方法 60只小鼠随机分为正常组(正常饲料,CD)和高脂组(高脂饲料,HFD),分饮食饲养20周.定期检测小鼠的体质量,苏木精-伊红(HE)染色和天狼猩红染色观察肝脏组织病理特点.高脂饮食15周时,原位灌注Ⅳ型胶原酶6～8 mL消化得到混合肝细胞,铺于40％的Percoll分离液上,进行密度梯度离心获得纯化的肝细胞,锥虫蓝染色确定细胞的活性,显微镜观察其形态.结果 随着建模时间的延长,HFD组小鼠的体质量逐渐增加,且增幅显著高于CD组;HFD组小鼠肝脏脂肪变性程度增加,在第20周伴随出现了纤维化;建模15周时,每只NAFLD小鼠可获得5×107～7×107个肝细胞,细胞存活率≥85％,细胞纯度≥95％,细胞呈圆形或椭圆形,其边缘平滑,且聚团少;通过精准控制温度、降低胶原酶浓度、使用低速离心和低速密度梯度离心等优化条件后,获得的细胞数量和质量均有显著提高.结论 成功构建了NAFLD小鼠模型,并揭示了不同疾病阶段肝脏的病理特点.探索了一种高效、稳定的获取NAFLD小鼠原代肝细胞的方法.所得肝细胞的数量和活性都符合大多数实验的要求.
作者：史冬雪；原佳琪；丁宝锋；王小爽；余佳
来源：基础医学与临床 2022 年 42卷 6期
