从慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血中扩增核心启动子(CP)基因序列,克隆入pGEM-Teasy质粒,随机挑选克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度.结果提示,HBV长期携带者体内有准种共存,CP区内存在热点缺失突变及散在点突变.为了进一步探讨CP区基因异质性对其转录活性的影响,将野生株及不同缺失突变的CP基因片段克隆入pcDNA3.1(-)载体的EcoRI位点,筛选反向克隆,经KpnI和XhoI双酶切后克隆入氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因表达载体pCAT3-basic上,构建重组报告质粒.以Lipofectamine PLUS转染试剂转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,用ELISA方法检测CAT表达量,反映了CAT基因上游启动子的转录活性.结果显示,成功构建了重组报告质粒,与野生株比较,HBV CP区准种群的存在不同程度地降低了CP基因的转录活性.
作者：刘妍；董菁；皇甫竞坤；成军；韩萍；牟劲松；李克；钟彦伟
来源：解放军医学杂志 2002 年 27卷 2期
