目的 制备病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片,并进行系列优化及临床应用性研究.方法 对于基因组较小的HBV、HDV病毒,采用Primer Premier 5.0软件针对其保守区域设计特异引物,普通PCR技术制备探针;利用限制性显示PCR(RD-PCR)技术制备基因组较大且复杂的HCV芯片探针.为了便于摸索实验条件和更好地进行探针优化,先后制备3种芯片,包括HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片及HBV、HDV、HCV联合诊断芯片.结果 杂交结果显示HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片的诊断效果较为满意.从以上2种芯片中选取探针制备HBV、HDV、HCV联合诊断芯片,并对该芯片的检测质量进行初步评估:①检测线性:病毒质粒拷贝数在104~1011copies/ml之间时,芯片检测法显示了较好的线性(r分别为0.990 2、0.992 1、0.981 9,P<0.01);②特异性:检测黄热病病毒(YFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、登革热病毒(DV)等其他病毒样品结果均为阴性,说明该芯片特异性较好;③重复性:检测HBV、HDV、HCV的批内精密度变异系数(Cv)值为7.1
作者:孙朝晖;王蜀燕;危敏;石玉玲;李林海;王从容
来源:解放军医学杂志 2007 年 32卷 11期