目的 探索Kruppel样因子4(KLF-4)与E-钙黏素(E-cadherin)在人腹膜间皮细胞(HPMCs)中的关系,以及二者在高糖腹膜透析液诱导的腹膜纤维化动物模型中的表达及作用.方法 在HPMCs中共转染KLF-4及E-cadherin启动子区域结合位点或其突变体质粒,利用试剂盒检测各结合位点及其匹配的突变体的荧光素酶活性,判断KLF-4是否可与E-cadherin启动子区域结合位点相结合;采用染色质免疫共沉淀实验(CHIP)检测KLF-4是否可与E-cadherin启动子区域结合位点相结合;采用Real-time PCR及Western blotting检测b、d、f、g结合位点及其匹配突变体E-cadherin的表达.将30只SD大鼠随机均分为盐水组、腹膜透析液组及实验组,每组10只.盐水组腹腔内注射0.9%NaCl溶液,腹膜透析液组腹腔内注射4.25%高糖腹膜透析液,实验组腹腔内注射4.25%高糖腹膜透析液并经尾静脉注射含有超声微泡的KLF-4质粒混悬液.采用HE染色观察3组大鼠腹膜组织的厚度,Masson染色观察3组大鼠腹膜组织中胶原纤维的沉积情况,免疫组织化学染色观察3组大鼠腹膜组织中KLF-4、E-cadherin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及纤维连接蛋白(FN)的表达水平.结果 启动子荧光素酶报告基因及CHIP检测结果显示,KLF-4可以与HPMCs中E-cadherin启动子区域的结合位点相结合.Real-time PCR及Weste
作者:车明文;徐国顺;龚杜景子;赵建乐;李晶;陈亚蓉;蒋希;马兴杰;何丽洁
来源:解放军医学杂志 2020 年 45卷 9期