目的:将人血管内皮生长因子165(hVEGF165)导入原代离体成肌细胞,观察该细胞hVEGF分泌情况,探讨成人自体转基因成肌细胞移植的可行性.方法:采用两步消化法对成人骨骼肌组织消化获取相对较纯的成肌细胞,通过差速贴壁法进行进一步的纯化.以脂质体转染法将pcDNA3.1-hVEGF165导入成肌细胞,通过RT-PCR、ELISA和Western-blot进行hVEGF165定量检测,MTT测定和Mile's实验检测VEGF165的生物学活性.结果:转基因细胞经RT-PCR扩增出一条VEGF的特异性泳带,ELISA显示转基因细胞培养上清VEGF浓度分别达到18.92±1.77 ng/mL、19.04±2.15 ng/mL,Western blot检测转基因成肌细胞上清均检测到VEGF蛋白特异性的杂交带,MTT显示转基因细胞上清明显促内皮细胞增殖,Mile's实验显示转基因细胞上清明显增加毛细血管通透性.结论:质粒pcDNA3.1-hVEGF165能成功转入成人成肌细胞,转基因细胞能分泌有生物活性的VEGF165蛋白.
作者：陈勇；周建大；邹永华；殷照初；李文波；李明；陈孜孜；李万猛
来源：激光生物学报 2010 年 19卷 1期
