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为了研究沉默FNBP1(formin-binding protein 1)基因对细胞体外增殖以及对细胞迁移能力的影响,设计并构建了3个靶向FNBP1siRNA干扰载体(Si-1,Si-2,Si-3),经酶切和DNA测序鉴定后转染人正常的肝细胞HL-7702.RT-PCR和Western blot检测瞬时转染细胞中FNBP1基因的干扰效率,筛选出特异高效的RNAi靶点.并用G418筛选稳定表达了RNAi的细胞株,用XTr法检测细胞体外增殖率,划痕法检测细胞的迁移能力.结果显示:酶切和测序结果证明干扰质粒构建正确;转染特异性的干扰质粒( Si-1、Si-2、Si-3)细胞的FNBP1基因表达量与对照组相比均有所降低,在蛋白质水平表达也明显受到抑制,且重组干扰质粒Si-2的干扰效应较强.XTT检测结果表明,构建的沉默FNBP1重组质粒Si-2能显著抑制HL-7702细胞的体外增殖能力,但并不直接影响HL-7702细胞的迁移能力.

作者:张乾英;王蕴红;朱重阳;张军

来源:激光生物学报 2011 年 20卷 04期

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作者:
张乾英;王蕴红;朱重阳;张军
来源:
激光生物学报 2011 年 20卷 04期
标签:
FNBP1 RNA干扰 HL-7702细胞
为了研究沉默FNBP1(formin-binding protein 1)基因对细胞体外增殖以及对细胞迁移能力的影响,设计并构建了3个靶向FNBP1siRNA干扰载体(Si-1,Si-2,Si-3),经酶切和DNA测序鉴定后转染人正常的肝细胞HL-7702.RT-PCR和Western blot检测瞬时转染细胞中FNBP1基因的干扰效率,筛选出特异高效的RNAi靶点.并用G418筛选稳定表达了RNAi的细胞株,用XTr法检测细胞体外增殖率,划痕法检测细胞的迁移能力.结果显示:酶切和测序结果证明干扰质粒构建正确;转染特异性的干扰质粒( Si-1、Si-2、Si-3)细胞的FNBP1基因表达量与对照组相比均有所降低,在蛋白质水平表达也明显受到抑制,且重组干扰质粒Si-2的干扰效应较强.XTT检测结果表明,构建的沉默FNBP1重组质粒Si-2能显著抑制HL-7702细胞的体外增殖能力,但并不直接影响HL-7702细胞的迁移能力.