目的：通过靶向 CTLA4 siRNA 探讨 CTLA4在 T 调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法：体外扩增培养利用磁珠分选出的 T 调节细胞，AO ／PI 染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线，流式细胞仪检测扩增后细胞表型；采用 Alex488染料标记 siRNA，通过流式细胞仪检测 siRNA 的转染效率；实时定量 PCR 检测靶向 CTLA4 siRNA 的沉默效率；流式细胞术检测 CTLA4在蛋白水平的变化；混合淋巴实验检测 CTLA4表达下调后，T 调节细胞的功能变化。结果：经过4周体外扩增，T 调节细胞能够增长约1200倍，并具有高活率和高纯度；siRNA 的转染效率为61．8％±4．5％；Realtime PCR 和流式细胞术检测 CTLA4在 mR-NA 水平和蛋白水平均有不同程度下降，其结果与对照组相比差异显著（P ＜0．05）；混合淋巴实验结果显示 T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖，Treg 细胞能够抑制这种增殖，但是 CTLA4表达下调后明显减弱了T 调节细胞的抑制能力。进一步，在 DC 细胞参与的混合淋巴实验中发现 Treg 能够通过 DC 抑制 T 效应细胞对异种抗原的应答，而 siCTLA4-Treg 不能通过 DC 抑制 T 效应细胞增殖。结论：CTLA4在 Treg 介导的异种免疫应答中发挥着重要作用，这种作用方式可能是通过直接作用于
作者：马小倩；王佳；王维
来源：激光生物学报 2016 年 25卷 4期
