目的：探讨改良体外分离、培养、扩增、纯化 SD 大鼠毛囊干细胞(rHFSCs)及其免疫、超微结构的鉴定方法,观察 rHFSCs 的生物学特性及成脂、成骨分化能力。方法2015年1—6月选取清洁级1周龄 SD 大鼠6只,在无菌条件下切取 SD 大鼠触须部皮肤,用 Dispase 酶和Ⅳ型胶原酶混合液消化,显微镜下分离毛囊隆突部,用梯度加液组织块贴壁法培养 rHFSCs,用两步酶消化法传代,用Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化 rHFSCs。收集第3代 rHFSCs,采用流式细胞术、免疫荧光染色及透射电镜观察 rHFSCs 内部结构等方法鉴定 rHFSCs。收集第1~10代 rHFSCs 检测细胞活力,第3、5、7、9代rHFSCs 培养第1~8天时检测细胞增殖能力。收集第3代 rHFSCs,按培养液的不同分为诱导组和对照组,对比两组目的基因 PPAR-γ、C/ EBPa、OPG、Runx2的相对表达量及染色后的光密度(OD)值变化情况,观察 rHFSCs 的成脂、成骨分化能力。结果通过改良方法分离、培养、纯化的 rHFSCs 呈典型的铺路石状,生长曲线呈“S”形,生长增殖能力良好,克隆形成能力强。透射电镜显示细胞处于原始状态。流式细胞术检测显示 Integrin β1、Integrin α6、P63呈高表达,CK15呈中等表达,符合 rHFSCs 标记鉴定特点。免疫荧光染色和透射电镜观察 rHFSCs 内部结构证明细胞的类型属于毛囊干细
作者：杜伟斌；全仁夫；郑宣；李强；曹国平；庄伟；邵荣学；杨迪生
来源：中华解剖与临床杂志 2016 年 21卷 6期
