目的:探讨溶菌酶N端多肽片段基因的重组并在原核中表达,研究该片段与晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)的结合作用.方法:从SD大鼠外周血白细胞中抽提总RNA,经逆转录并扩增大鼠溶菌酶N端基因片段,以质粒pET-30a(+)为载体构建表达质粒pLY77.含pLY77的工程菌Rosetta(DE3)经IPTG诱导,对该重组多肽进行高效表达.表达产物经Ni+-NTA琼脂糖柱层析纯化后,得到的溶菌酶N端多肽片段LY77经SDS-PAGE和Western印迹法鉴定,ELISA法分析体外结合活性.结果:LY77在Rosetta(DE3)中高效表达,主要以可溶性蛋白的形式存在,相对分子质量约为11 000;LY77对体外制备的晚期糖基化蛋白BSA-AGEs具有显著的结合活性.结论:LY77对AGEs具有很高的亲和力,为进一步探讨LY77可能应用于体内促进AGEs的清除和参与免疫调节作用奠定基础.
作者：周翔；莫宏波；周羽竝；刘誉
来源：暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006 年 27卷 6期
