目的 构建hERα真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位.方法 以pcDNA3.1-flaghERα仅重组质粒(Dr.Muyan M馈赠)为模板,PCR扩增hER α全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体.将构建的重组质粒测序并转染到乳腺癌细胞MCF-7中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-hERα在MCF-7细胞内定位.结果 hER α全长基因序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1800bp.Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为95KD,pEGFP-hERα在乳腺癌细胞MCF-7细胞内定位于细胞核内.结论 成功的构建了hERα全长基因真核表达载体pEGFP-hERα,融合蛋白定位于乳腺癌细胞核内.
作者：刘芙蓉；李彦姝；张红艳；李丰
来源：解剖科学进展 2011 年 17卷 2期
