目的 以人包皮成纤维细胞为饲养层体外培养人胚胎生殖细胞,观察饲养层对其生长的影响,并对人胚胎生殖细胞进行鉴定.方法 分离培养4～5岁小儿包皮成纤维细胞,取P3～P30代细胞用丝裂霉素灭活后铺板备用,酶联免疫吸附测定(ELISA)-双抗夹心法检测其分泌物成纤维细胞生长因子(FGF)的含量;分离培养5～11周人胚胎原始生殖细胞,在不添加任何细胞因子的人包皮成纤维细胞饲养层上培养人胚胎生殖细胞;细胞化学法检测人胚胎生殖细胞碱性磷酸酶的活性,免疫细胞化学法检测其胚胎表面特异性抗原SSEA-1及SSEA-4的表达,RT-PCR法检测Oct-4的表达.结果 包皮成纤维细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;P3～P30代包皮成纤维细胞上清液中FGF含量在(172.09±2.66)pg/L～(245.25±1.66)pg/L之间波动.分离培养的人胚胎生殖细胞在饲养层上可形成典型的胚胎生殖细胞集落,体外连续培养超过3代,其碱性磷酸酶活性呈强阳性,集落未分化标志检测显示SSEA-l、SSEA-4呈阳性,Oct-4表达阳性.结论 用人包皮成纤维细胞作为饲养层能支持人胚胎生殖细胞的生长并维持未分化状态.
作者：黎晓莉；王璐；吴宏；张雁；关雪晶；姜蓉
来源：解剖学报 2010 年 41卷 6期
