目的 建立缺血缺氧损伤细胞模型,探讨永久性缺血缺氧致神经细胞损伤机制及其对PC12细胞自噬的影响.方法 采用经典的神经细胞模型PC12细胞作为研究对象,利用无糖的DMEM培养基和缺氧罐(95％N2和5％ CO2)培养PC12细胞,模拟体内神经细胞缺血缺氧环境.细胞分为对照组(在正常条件下,使用完全培养基培养细胞)和糖氧剥夺(OGD)处理组(在缺氧条件下,使用OGD培养基培养细胞):0.5h(OGD +0.5h)、2h(OGD+2h)、6 h(OGD +6h)、12h(OGD+ 12h)和24h(OGD+ 24h).利用MTT检测细胞存活率,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率,免疫荧光以及Western blotting法检测低氧诱导因子-1 α(HIF-1 α)、环氧化酶-2 (COX2)、微管相关蛋白轻链3(LC3)和Beclin-1的表达,透射电子显微术检测自噬体的超微结构,探讨不同永久性缺血缺氧时间对细胞损伤以及自噬的影响.结果 与对照组相比,细胞存活率下降,呈OGD时间依赖性,且自OGD6h显著下降,差异具有统计学意义(P＜0.05);细胞凋亡率和坏死率持续增高,与OGD时间呈正相关,且自OGD 12h后显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);HIF-1 α和COX2蛋白表达随OGD时间延长逐渐升高,OGD 12h后增高显著,差异具有统计学意义(P＜0.05).OGD组被荧光标记的绿色的LC3蛋白相对于对照组,
作者：厉永强；王萌；王来；刘彬；石贞玉；邓锦波
来源：解剖学报 2017 年 48卷 3期
