目的:构建Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein-1,YB-1)特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体.方法:采用人U6SnRNA启动子,分别把被9 bp序列间隔的19 bp长短的YB-1靶序列的反向重复序列,置于pGensil-1质粒载体中,构建成YB-1短发夹环RNA,产生重组质粒pGensil-1/U6/YBX11,pGensil-1/U6/YBX12及pGensil-1/U6/YBX13.分别用Pst Ⅰ和Sal Ⅰ酶切鉴定;并将经酶切鉴定正确后的重组质粒作测序分析.结果:YB-1的特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil-1质粒中,Sal Ⅰ酶切鉴定可切出400 bp大小的片段,DNA测序分析显示,重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致.结论:成功构建了针对YB-1的特异性shRNA真核表达载体pGensil-1/U6/YBX11,pGensil-1/U6/YBX12及pGensil-1/U6/YBX13,为进一步研究其基因功能打下了基础.
作者：周磊磊；许文林；秦茹娟；唐华容；沈慧玲
来源：江苏大学学报（医学版） 2007 年 17卷 1期
