目的：构建幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H．pylori）Ⅳ型分泌系统 cagQ 基因缺失株。方法：通过 PCR 扩增出 cagQ 基因编码区侧翼同源臂序列，经 TA 克隆后进行双酶切，并将纯化后上下游同源臂连接至两端含有卡那霉素抗生素基因的载体 pBluscriptSK II（-），构建为 cagQ 基因自杀质粒。利用电穿孔法将自杀质粒导入 H．pylori，进行同源重组。培养后通过卡那霉素抗生素筛选出基因缺失株，并经 PCR 及核酸序列分析进一步确定基因缺失株。结果：H．pylori 的 cagQ 基因自杀质粒 pBlueKM40-△cagQ 经酶切验证无误，进行电转化后经 PCR 及核酸序列分析结果正确。结论：成功获得 H．pylori cagQ 基因缺失株，命名为 Hp26695-△cagQ。
作者：姚逸正；王华；倪颖；沈以新；徐驰；孙凤英；邵世和
来源：江苏大学学报（医学版） 2014 年 6期
