目的:探讨沉默ERCC1和BRCA2基因后逆转顺铂耐药肺癌细胞株(A549/DDP)对顺铂耐药性的效应及其分子机制.方法:合成针对ERCC1和BRCA2基因的siRNAs(ERCC1-siRNA和BRCA2-siRNA),用脂质体转染试剂将其分别或共同转染于A549/DDP细胞.蛋白质印迹法测定转染前后A549/DDP细胞ERCC1和BRCA2蛋白的表达以确定转染成功,并检测转染前后A549/DDP细胞经顺铂诱导的FANCD2单泛素化水平及BRCA1和RAD51蛋白表达水平;CCK-8法测定转染前后A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后A549/DDP细胞凋亡率;免疫荧光法测定转染前后A549/DDP细胞核内FANCD2核聚小体和RAD51核聚小体的表达.结果:A549/DDP细胞转染ERCC1-siRNA和BRCA2-siRNA后ERCC1和BRCA2蛋白表达均明显降低(P<0.05),表明转染有效.转染ERCC1-siRNA后顺铂诱导的FANCD2蛋白单泛素化水平和核聚小体表达均明显降低.转染BRCA2-siR-NA后顺铂诱导的BRCA1和RAD51蛋白表达及RAD51核聚小体表达明显降低.与此同时,转染ERCC1-siRNA或BRCA2-siRNA均可增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,以及增强顺铂诱导的细胞凋亡作用,共转染ERCC1-siRNA和BRCA2-siRNA则进一步增强顺铂对A549/DDP的细胞毒性作用.结论:沉默ERCC1和BRCA2基因可通过抑制A549/DDP细胞株范可尼贫血通路和

作者：程成国；李坚；金君

来源：江苏大学学报（医学版） 2017 年 27卷 1期