目的:探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) E6蛋白与氯离子通道蛋白5(chloride voltage-gated channel 5,CLCN5)之间的关系以及CLCN5对宫颈癌细胞迁移的影响.方法:采用RNA干扰技术敲低HPV E6基因,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测敲低HPV E6后宫颈癌HeLa细胞中CLCN5 mRNA及蛋白的表达水平.通过PCR扩增CLCN5基因片段,并将其克隆至表达载体pCDNA3.1-3×Flag(简称pCDNA3.1)质粒中,构建重组质粒pCDNA3.1-CLCN5.将目的质粒pCDNA3.1-CLCN5及其对照pCDNA3.1质粒分别转染宫颈癌HeLa细胞,蛋白质印迹法检测CLCN5蛋白的表达.Transwell迁移实验检测过表达CLCN5对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响.同时,将CLCN5的小干扰RNA及其阴性对照分别转染宫颈癌HeLa细胞,Transwell迁移实验检测敲低CLCN5对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响.结果:RT-qPCR和蛋白质印迹检测结果显示,敲低HPV E6可显著降低CLCN5的mRNA和蛋白表达水平.质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pCDNA3.1-CLCN5构建成功.蛋白质印迹检测结果显示CLCN5蛋白在宫颈癌HeLa细胞中被有效过表达或敲低.Transwell迁移实验结果表明,过表达CLCN5可促进宫颈癌细胞的迁移,敲低CLCN5可抑制宫颈癌细胞的迁移.结论:HPV E6蛋白通过上调CLCN5的表达促进宫颈癌

作者：赵凯旋；徐静云；卢春

来源：江苏大学学报（医学版） 2018 年 28卷 2期