目的:表达纯化重组的人乙酰肝素酶 (heparanase,HPA).方法:以表达乙酰肝素酶全长质粒pcDNA3.1-HPA为模板,扩增不包括信号肽的乙酰肝素酶片段,将其插入pET-28a(+)载体,转化到大肠杆菌BL21(plysS,DE3)中,在起始诱导菌密度、诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度4个方面对诱导条件进行了优化,实现了重组人乙酰肝素酶的可溶性表达.采用HisTrapTMcrude亲和层析对目的蛋白进行了初步纯化.结果:得到了初步纯化的HPA蛋白,Western 印迹证实表达产物可被乙酰肝素酶抗体和His标签抗体识别,证明表达产物具有乙酰肝素酶的免疫学特性.结论:表达纯化的人HPA蛋白为特异性单抗的制备和鉴定提供了实验材料.
作者：高红伟；田曙光；崔真源；李素波；檀英霞；王璇琳；冉菘余；宫锋
来源：军事医学科学院院刊 2009 年 33卷 5期
